TÉCNICAS DE BIOLOGIA MOLECULAR 3 - PCR

Fique por dentro das aplicações e passos da PCR (Polymerase Chain Reaction).

Reação em Cadeia da Polimerase - PCR é uma técnica muito utilizada nos laboratórios de Biologia Molecular pois produz bilhões de copias de um segmento especifico de DNA por replicação in vitru.

Aplicações da PCR:

- Sequenciamento direto dos produtos amplificados por PCR
- Amplificação do mesmo gene em indivíduos diferentes para a comparação de alelos causadores de doenças e de alelos normais.
- Diagnostico de doenças infeciosas - amplificação especifica do DNA ou RNA viral/bacteriano.
- Diagnostico pré-natal em casos de risco e histórico paterno conhecido.
- Identificação individual - Medicina Forense e testes de Paternidade.
- Estudos de padrão de expressão gênica - a partir do mRNA

PASSOS DA PCR:

  1. É necessário uma amostra de DNA - pode ser minima pois a partir de uma unica célula é possível produzir bilhões de cópias do DNA de interesse por PCR. A amostra é colocada em um tubo.
  2. Adiciona-se então Primers em média de 18 nucleotídeos com sequencias complementares as extremidades do fragmento de DNA de interesse. É ESSA SEQUÊNCIA QUE CONFERE ESPECIFICIDADE À REAÇÃO.
  3. É adicionado também os dNPTs que são os nucleotídeos que irão atuar na reação
  4. Ao fim adicionamos a Enzima DNA polimerase extraída da uma bactéria termófila a qual permanece estável em altas temperaturas
  5. Após a adição de todos os produtos necessários para a reação, o tubo é colocado em um termociclador. Ele é uma fonte de temperaturas alternadas que promovem todas as etapas da PCR


- 94ºC promove a desnaturação do DNA
- 50-60º C promove o anelamento específico dos Primers
- 72ºC temperatura ideal para que a polimerase atue.


Após o tubo ser colocado no termociclador, o mesmo proporciona essas variações de temperatura. Cada 3 mudanças dessa conferem 1 ciclo ao termociclador. Ao final de 30 ciclos iremos ter produzido bilhões de cópias do DNA alvo.

Faça você mesmo sua reação de PCR AQUI

Publicado por Ana Carolina Dada

Autora do Blog Biomedicina Online e estudante de Biomedicina da FURB-SC .
    Blogger Comment
    Facebook Comment

0 comentários :

Postar um comentário