Fique por dentro das aplicações e passos da PCR (Polymerase Chain Reaction).
Reação em Cadeia da Polimerase - PCR é uma técnica muito utilizada nos laboratórios de Biologia Molecular pois produz bilhões de copias de um segmento especifico de DNA por replicação in vitru.
Aplicações da PCR:
- Sequenciamento direto dos produtos amplificados por PCR- Amplificação do mesmo gene em indivíduos diferentes para a comparação de alelos causadores de doenças e de alelos normais.
- Diagnostico de doenças infeciosas - amplificação especifica do DNA ou RNA viral/bacteriano.
- Diagnostico pré-natal em casos de risco e histórico paterno conhecido.
- Identificação individual - Medicina Forense e testes de Paternidade.
- Estudos de padrão de expressão gênica - a partir do mRNA
PASSOS DA PCR:
- É necessário uma amostra de DNA - pode ser minima pois a partir de uma unica célula é possível produzir bilhões de cópias do DNA de interesse por PCR. A amostra é colocada em um tubo.
- Adiciona-se então Primers em média de 18 nucleotídeos com sequencias complementares as extremidades do fragmento de DNA de interesse. É ESSA SEQUÊNCIA QUE CONFERE ESPECIFICIDADE À REAÇÃO.
- É adicionado também os dNPTs que são os nucleotídeos que irão atuar na reação
- Ao fim adicionamos a Enzima DNA polimerase extraída da uma bactéria termófila a qual permanece estável em altas temperaturas
- Após a adição de todos os produtos necessários para a reação, o tubo é colocado em um termociclador. Ele é uma fonte de temperaturas alternadas que promovem todas as etapas da PCR
- 94ºC promove a desnaturação do DNA
- 50-60º C promove o anelamento específico dos Primers
- 72ºC temperatura ideal para que a polimerase atue.
Após o tubo ser colocado no termociclador, o mesmo proporciona essas variações de temperatura. Cada 3 mudanças dessa conferem 1 ciclo ao termociclador. Ao final de 30 ciclos iremos ter produzido bilhões de cópias do DNA alvo.
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